Clonación molecular de los genes GDP-L-galactosa fosforilasa, L-galactosa deshidrogenasa y L-galactono-1.4-lactona deshidrogenasa de la vía biosintética de vitamina C en Myrciaria dubia (camu camu)

Resumen

El objetivo del estudio fue realizar la clonación molecular de los genes que codifican las enzimas, GDP-L-galactosa fosforilasa (GGF), L-galactosa deshidrogenasa (GDH) y L-galactono-1,4-lactona deshidrogenasa (GLDH) de la ruta biosintética de vitamina C de Myrciaria dubia (Kunth) McVaugh. Los frutos fueron obtenidos de la Colección Nacional de Germoplasma de M. dubia del Instituto Nacional de Innovación Agraria. El ARN se purificó, se sintetizó el ADNc y amplificó con cebadores degenerados, se clonó y secuenció con técnicas estándares. Sobre la base de la secuencia obtenida se diseñaron cebadores para posteriores estudios de expresión genética. El ARN total purificado fue de alta calidad por los ratios de absorbancia (A /A = 1,9 ± 0,1, A /A = 4,0 ± 0,2) y la integridad del ARN (bandas visibles de ARN ribosomal 28S y 18S en el gel de agarosa). Con los cebadores degenerados se amplificaron con éxito segmentos de los tres genes (GGF = 388 pb, GDH = 783 pb y GLDH = 921 pb) y diseñaron cebadores específicos apropiados para estudios de expresión genética mediante PCR en tiempo real. En conclusión, con las estrategias empleadas se realizó la clonación molecular de segmentos de los genes GGF, GDH y GLDH que participan en la biosíntesis de vitamina C en M. dubia